Larutan uji Timbang saksama sejumlah zat uji masukkan ke dalam labu tentukur yang sesuai, larutkan dan encerkan dengan air sampai tanda hingga diperoleh kadar lebih kurang 5 mg per mL polisakarida kering. Buat enceran hingga diperoleh kadar antara 125 dan 500 μg glukosamin (heksosamin). Pipet 1,0 mL enceran larutan ke dalam gelas ukur.
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 60 mg glukosamin hidroklorida P masukkan ke dalam labu tentukur 100-mL. Larutkan dan encerkan dengan air sampai tanda (larutan mengandung 0,500 g glukosamin per liter).
Larutan baku kerja Pipet 0,25 mL, 0,50 mL, 0,75 mL, dan 1,0 mL larutan baku ke dalam 4 gelas ukur. Blangko Gunakan 1 mL air.
Buat volume masing-masing gelas ukur menjadi 1 mL dengan air. Tambahkan 1 mL larutan asam hidroklorida P (292 g per L) ke dalam setiap gelas ukur. Tutup gelas ukur dan masukkan ke dalam penangas air selama 1 jam. Dinginkan hingga suhu ruang. Tambahkan ke dalam setiap gelas ukur 0,05 mL larutan 5 g per L timolftalein P dalam etanol P; tambahkan larutan natrium hidroksida P (200 g per L) hingga terjadi warna biru dan kemudian tambahkan asam hidroklorida 1 N sampai larutan tidak berwarna. Encerkan volume dalam setiap gelas ukur hingga 10 mL dengan air (hidrolisat netral).
Dalam gelas ukur 10 mL seri kedua, tempatkan 1 mL masing-masing hidrolisat yang dinetralkan. Tambahkan 1 mL pereaksi asetilaseton (campuran 1 volume asetilaseton P dan 50 volume larutan natrium karbonat anhidrat P 53 g per L, disiapkan segera sebelum digunakan) ke setiap gelas ukur. Tutup gelas ukur dan masukkan ke dalam tangas air pada suhu 90 °C selama 45 menit. Dinginkan hingga suhu ruang. Dalam setiap gelas ukur tambahkan 2,5 mL etanol P dan 1,0 mL larutan dimetilaminobenzaldehida (larutkan 0,8 g dimetilaminobenzaldehida P dalam 15 mL etanol P dan tambahkan 15 mL asam hidroklorida P, disiapkan segera sebelum digunakan) dan encerkan volume dalam setiap gelas ukur dengan etanol P hingga 10 mL. Tutup gelas ukur, campur dengan membalik gelas ukur dan biarkan di tempat gelap selama 90 menit. Ukur serapan masing-masing larutan pada panjang gelombang maksimum 530 nm menggunakan blangko sebagai koreksi.
Buat kurva kalibrasi dari serapan untuk 4 larutan baku dan kandungan heksosamin yang sesuai dan baca dari kurva jumlah heksosamin dalam larutan uji.