Dalam prosedur berikut, steroid yang akan ditetapkan kadarnya dipisahkan dari steroid asing sejenis dan eksipien dengan cara kromatografi lapis tipis dan ditetapkan perolehan kembali dari kromatogram.

    Penyiapan lempeng Buat lumpuran dari 30 g silika gel dengan zat berfluoresensi yang sesuai, dengan menambahkan bertahap dan mencampur, lebih kurang 65 mL campuran air-etanol P (5:2). Pindahkan lumpuran ke atas lempeng bersih 20 cm x 20 cm, ratakan hingga diperoleh lapisan serba rata setebal 0,25 mm dan keringkan pada suhu kamar selama 15 menit. Panaskan lempeng pada suhu 105º selama 1 jam dan simpan dalam desikator.

    Fase gerak A Buat campuran diklorometana P-metanol P (180:16).

    Fase gerak B Buat campuran kloroform P-aseton P (4:1).

    Larutan baku Timbang saksama sejumlah Baku Pembanding FI yang tertera pada masing-masing monografi, yang sebelumnya telah dikeringkan menurut cara yang tertera pada monografi, larutkan dalam campuran kloroform P-etanol P (1:1) hingga kadar lebih kurang 2 mg per mL.

    Larutan uji Buat seperti tertera pada masing-masing monografi.

    Prosedur Bagi lempeng menjadi 3 bagian yang sama, bagian kiri dan kanan masing-masing untuk Larutan uji dan Laruan baku dan bagian tengah untuk blangko. Totolkan terpisah berupa garis masing-masing 200 µl Larutan uji dan Larutan baku dengan jarak 2,5 cm dari tepi bawah lempeng. Keringkan lempeng dengan aliran udara. Dengan menggunakan Fase gerak yang terdapat pada masing-masing monografi, eluasi lempeng dalam bejana kromatografi yang sesuai, yang sebelumnya telah dijenuhkan, hingga fase gerak merambat 15 cm dari garis penotolan. Angkat lempeng, uapkan fase gerak, dan amati bercak utama berupa pita dari Larutan baku di bawah cahaya ultra violet. Tandai pita ini, dan pita yang sesuai dari Larutan uji dan blangko. Pindahkan silika gel dari tiap-tiap pita secara terpisah ke dalam tabung sentrifuga 50 mL bersumbat kaca. Ke dalam tiap tabung tambahkan 25,0 mL etanol P, dan kocok selama tidak kurang dari 2 menit. Sentrifus selama 5 menit, pipet 20 mL beningan dari masing-masing tabung ke dalam labu Erlenmeyer 50 mL bersumbat kaca, tambahkan 2,0 mL larutan yang dibuat dengan melarutkan 50 mg biru tetrazolium P dalam 10 mL metanol P, dan campur. Lakukan seperti tertera pada Prosedur pada Penetapan Kadar Steroid <631> mulai dari “Kemudian ke dalam tiap labu”.