Clonazepam
5-(o-Klorofenil)-1,3-dihidro-7-nitro-2H-1,4-benzodiazepin-2-on [1622-61-3]
C15H10ClN3O3 BM 315,71
Klonazepam mengandung tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 102,0% C15H10ClN3O3, dihitung terhadap zat kering.
Pemerian Serbuk kuning muda; bau lemah.
Kelarutan Tidak larut dalam air; agak sukar larut dalam aseton dan dalam kloroform; sukar larut dalam etanol dan dalam eter.
Baku pembanding Klonazepam BPFI; tidak boleh dikeringkan, simpan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya. Senyawa sejenis A Klonazepam BPFI (3-Amino-4-(2-klorofenil)-6-nitrokarbostiril, C15H10ClN3O3 BM 315,72); tidak boleh dikeringkan, simpan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya. Senyawa sejenis B Klonazepam BPFI (2-Amino-2’-kloro-5-nitrobenzofenon; C13H9ClN2O3 BM 276,68; tidak boleh dikeringkan, simpan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya. Senyawa sejenis C Klonazepam BPFI (2-Bromo-2’-(2-klorobenzoil)-4’-nitroasetanilid); tidak boleh dikeringkan, simpan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya dalam lemari pendingin.
Identifikasi Spektrum serapan inframerah zat kering dan didispersikan dalam kalium bromida P menunjukkan maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama seperti pada Klonazepam BPFI.
Jarak lebur <1021> Antara 237° dan 240°.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 0,5%; lakukan pengeringan pada suhu 105° selama 4 jam.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 0,1%.
Logam berat <371> Metode III Tidak lebih dari 20 bpj.
Cemaran organik C Klonazepam Tidak lebih dari 0,2%. Lakukan penetapan dengan cara Kromatografi lapis tipis seperti tertera pada Kromatografi <931>.
Penjerap Campuran silika gel P setebal 0,25 mm.
Fase gerak Campuran aseton P - n-heptanaP (3:2).
Larutan baku Timbang saksama sejumlah Senyawa Sejenis C Klonazepam BPFI, larutkan dalam aseton P hingga kadar lebih kurang 50 µg per mL.
Larutan uji Timbang saksama sejumlah zat, larutkan dan encerkan dengan aseton P hingga kadar lebih kurang 25 mg per mL.
Prosedur Totolkan secara terpisah masing-masing 20 µL Larutan uji dan Larutan baku pada lempeng kromatografi. Masukkan lempeng ke dalam bejana kromatografi yang berisi Fase gerak dan biarkan Fase gerak merambat hingga lebih kurang tiga per empat tinggi lempeng. Angkat lempeng, tandai batas rambat dan biarkan kering. Semprot lempeng dengan asam sulfat 2 N, keringkan pada suhu 105° selama 15 menit. Semprot lempeng berturut-turut dengan larutan natrium nitrit 0,01 M, larutan amonium sulfamat 9 mM dan N-1-naftiletilendiamin dihidroklorida LP, keringkan lempeng dengan aliran udara: tidak ada bercak sekunder dari Larutan uji yang lebih besar ukuran dan intensitasnya dari bercak utama Larutan baku.
Cemaran organik Masing-masing senyawa sejenis A klonazepam dan senyawa sejenis B klonazepam tidak lebih dari 0,1%; cemaran lain tidak lebih dari 0,2% dan total cemaran tidak lebih dari 0,3%.
Dapar, Fase gerak, Larutan kesesuaian sistem, Larutan baku, Larutan uji dan Sistem kromatografi, lakukan seperti tertera pada Penetapan kadar.
Prosedur Suntikkan sejumlah volume (lebih kurang 50 µL) Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur semua respons puncak. Hitung persentase masing-masing cemaran dalam zat dengan rumus:
P adalah faktor respons relatif untuk senyawa sejenis A klonazepam, senyawa sejenis B klonazepam dan cemaran lain berturut-turut adalah 1,84; 0,94 dan 1; ri adalah respons puncak masing-masing cemaran dalam Larutan uji dan rC adalah respons puncak klonazepam dalam Larutan uji.
Penetapan kadar Lakukan penetapan dengan Kromatografi cair kinerja tinggi seperti tertera pada Kromatografi <931>.
Dapar Timbang lebih kurang 6,6 g amonium fosfat dibasa anhidrat P, masukkan ke dalam labu tentukur 1000-mL, larutkan dalam 950 mL air, atur pH hingga 8,0 dengan penambahan asam fosfat 1 N atau natrium hidroksida 1 N, encerkan dengan air sampai tanda.
Fase gerak Buat campuran Dapar-metanol P- tetrahidrofuran P (60:52:13). Saring dan awaudarakan. Jika perlu lakukan penyesuaian menurut Kesesuaian sistem seperti tertera pada Kromatografi <931>.
Pengencer Buat campuran air-metanol P- tetrahidrofuran P (60:52:13).
Larutan baku Timbang saksama sejumlah Klonazepam BPFI, larutkan dan encerkan dengan Pengencer hingga kadar lebih kurang 0,1 mg per mL.
Larutan kesesuaian sistem Timbang saksama sejumlah Senyawa sejenis A Klonazepam BPFI, Senyawa Sejenis B Klonazepam BPFI dan Klonazepam BPFI, larutkan dalam Pengencer, hingga kadar masing-masing lebih kurang 0,04 mg per mL.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 10 mg zat, masukkan ke dalam labu tentukur 100-mL, larutkan dan encerkan dengan Pengencer sampai tanda, campur.
Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada Kromatografi <931>. Kromatograf cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor 254 nm dan kolom 4,6 mm × 15 cm berisi bahan pengisi L7 dan laju alir lebih kurang 1 mL per menit. Lakukan kromatografi terhadap Larutan kesesuaian sistem, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti yang tertera pada Prosedur: waktu retensi relatif senyawa sejenis A klonazepam, senyawa sejenis B klonazepam dan klonazepam berturut-turut adalah 2,2; 2,5 dan 1,0. Resolusi, R, antara senyawa sejenis A klonazepam dan senyawa sejenis B klonazepam tidak kurang dari 2,0. Lakukan kromatografi terhadap Larutan baku, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti yang tertera pada Prosedur: faktor ikutan tidak lebih dari 1,5 dan simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 2,0%.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 50 µL) Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur respons puncak utama. Hitung jumlah dalam mg, klonazepam, C15H10ClN3O3, dalam zat yang digunakan dengan rumus:
C adalah kadar Klonazepam BPFI dalam mg per mL Larutan baku; rU dan rS berturut-turut adalah respons puncak dari Larutan uji dan Larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat, tidak tembus cahaya pada suhu ruang.